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分 类 号：
C12N1/20;C12N13/00
颁 证 日：
优 先 权：
申请(专利权)人：
浙江大学
地 址：
310027浙江省杭州市西湖区玉古路20号
发 明 (设计)人：
陈集双;胡秀芳;唐爱菊;唐骏
国 际 申 请：
国 际 公 布：
进入国家日期：
专利 代理 机构：
杭州求是专利事务所有限公司
代 理 人：
张法高
摘要
本发明公开了一种芽孢杆菌解磷工程菌株的构建方法。构建芽孢杆菌解磷工程菌株的方法的步骤为：1)在斜面上活化培养芽孢杆菌，所用培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，活化后的细菌，直接用生理盐水或磷酸缓冲液洗脱成菌悬液；2)将菌悬液离心，收集孢子，用生理盐水或磷酸缓冲液将孢子稀释并涂布于无菌的空白平皿或载玻片上，干燥；3)在真空、无菌条件下将离子束注入芽孢杆菌；4)用生理盐水或磷酸缓冲液洗脱孢子，获得高效分解有机磷的工程菌株。本发明应用诱变效率高、突变幅度大的新型诱变技术——离子束注入构建工程菌，增强芽孢杆菌分解有机磷和无机磷的能力，实现土壤自净和营养自给的双重功能。
主权项
权利要求书
1.一种芽孢杆菌解磷工程菌株的构建方法，其特征在于它的步骤为：
1)在斜面上活化培养芽孢杆菌，所用培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，活化
后的芽孢杆菌，直接用生理盐水或磷酸缓冲液洗脱成菌悬液；
2)将菌悬液离心，收集孢子，用生理盐水或磷酸缓冲液稀释孢子并涂布于
无菌的空白平皿或载玻片上；干燥0.5～2h；
3)将N+、H+、Ar+或He+离子束注入芽孢杆菌，所注入的离子能量为10～30
KeV、剂量为5～300×1014io /cm2，在2×10-2～6×10-3Pa真空、无菌条件下
进行间歇脉冲式注入，每次脉冲间隔50～100秒；
4)用生理盐水或磷酸缓冲液洗脱经离子束注入处理过的孢子，并稀释至一
定浓度，在 RIY培养基上进行筛选，然后经过鉴定，获得高效分解有机磷的
工程菌株。
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