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分 类 号:
A01H3/00
颁 证 日:
优 先 权:
申请(专利权)人:
上海交通大学
地 址:
200030上海市华山路1954号
发 明 (设计)人:
武天龙;邱承祥;马晓红
国 际 申 请:
国 际 公 布:
进入国家日期:
专利 代理 机构:
上海交达专利事务所
代 理 人:
毛翠莹
摘要
一种超声波辅助大豆原位丛生芽转化的方法,将种子经过消毒放在萌发培养基上萌发,取去除顶芽后的外植体,放在预培养基上预培养,在超声场中进行农杆菌感染,通过在一定的超声波条件下空气化效应过程中,气泡团闭合形成的瞬间高压造成许多微损伤,以避免刀割伤口对外植体造成的过度损伤,处理后取出放在共培养基上共培养,放在含有卡那霉素的除菌培养基上除菌,放在芽伸长培养基上筛选不定芽,然后诱导生根移栽。本发明采用农杆菌转化腋芽分生组织区的方式,在感染过程中采用超声波辅助转化的方法,从而提高转化率,得到较多的转化植株。
主权项
权利要求书
1、一种超声波辅助大豆原位丛生芽转化的方法,其特征在于具体包括如
下步骤:
1)大豆种子经过消毒,放在M +6-BA0.4mg/L(PH5.8)培养基上萌发5
天,去顶芽并制造伤口,得到外植体,放在M +6-BA10mg/L+IBA
0.2mg/L(PH5.8)培养基预培养一天;
2)置于100ml的三角瓶中,加入制备好的农杆菌菌液(0D600nm≈0.5),
三角瓶浸于功率500W,工作频率50kHz的超声波洗器中央,超声
波侵染处理15~20分钟,农杆菌感染10~20分钟,放在M +6-
BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L(PH5.8)培养基上共培养3天,取出放在
M +6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L+头孢霉素300mg/L+羧苄青霉素
300mg/L(PH5.8)培养基上除菌2周;
3)除菌后的外植体放在M +卡那霉素80mg/L(PH5.8)培养基上,每
2周转接一次,进行筛选至出现不定芽,伸长到1~2cm时切除子叶,
至伸长到3~4cm;
4)切下外植体上的不定芽并放在1/2M +卡那霉素50mg/L(PH5.8)培
养基上,进行转化芽诱导生根15~20天,移栽到大盆直至获得转化
植株产生的种子。
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