饲料中碘化酪蛋白的测定方法

sp;       址： 200072上海市闸北区延长路149号
发明 (设计)人：胡建军;陈宇光国际申请：
国际公布：   进入国家日期：
专利代理机构：   上海上大专利事务所代   理   人：顾勇华

摘要　
本发明涉及一种饲料中碘化酪蛋白的测定方法。该方法包括如下步骤：碘离子催化铈铵反应的标准工作曲线的绘制，饲料样品的准备以及饲料中碘化酪蛋白的测定，本方法中饲料样品经过索氏抽提、等电点沉淀和三氯乙酸沉淀，除去了干扰的有机碘和无机碘化物，使样品中的碘仅以特有的有机结合碘碘化蛋白形式存在，因此使用本方法测定样品中的蛋白碘含量，回收率高，相对偏差小。而且该方法操作简单，成本低，灵敏度高，是一种切实可行的检测方法。
主权项　
1.一种饲料中碘化酪蛋白的测定方法，其特征在于，该方法的具体步骤如下： a.工作曲线的绘制：首先配制浓度在0.04μg/ml～0.5μg/ml范围内的一系列碘化钾的标准工作溶液，并分别移取0.2ml碘化钾的标准工作溶液置于10ml 的具刻度比色管中，再依次加入0.01mol/l的亚砷酸1.68ml、2.5mol/l的硫酸4ml和蒸馏水4ml，混匀，在20℃-30℃温度下温浴15分钟，同时将 0.002mol/L硫酸高铈铵溶液同温温浴，15分钟后迅速将0.78ml的硫酸高铈铵溶液依次加入至各比色管中，加蒸馏水至刻度混匀，控制水浴反应时间为 15分钟-20分钟，以蒸馏水为参比，用1ml的比色皿在317nm波长处依次测定各比色管中各溶液的吸光度，记为At；同时，测定装有蒸馏水的空白管在317nm波长处的吸光度，记为A0；然后绘制出Ln(A0/At)-碘离子浓度C的关系曲线，根据该关系曲线，可求出曲线方程； b.饲料样品的准备：饲料经粉碎后，以无水乙醇为提取液，用索氏提取器提取直至索氏提取器内液体呈无色，取出样品包，在70℃烘干；倒入烧杯中，用 pH值为4.7的乙酸-乙酸钠缓冲液洗涤样品包，离心分离，分离上清，再加入的乙酸-乙酸钠缓冲液洗涤，离心分离，分离上清，再合并上清；以1ml上清加入100μl的浓度为100％(W/V)的三氯乙酸进行沉淀，合并沉淀并烘干；转移到瓷坩埚中，以碳酸钾固定碘，硫酸锌助熔进行样品灰化处理，过滤坩埚中内容物，再用热水洗涤滤渣，将滤液和洗液收集到100ml的容量瓶中，并加蒸馏水定容到刻度，摇匀，此液待测； c.饲料中碘化酪蛋白的测定：取0.2ml上述待测液于10ml具刻度比色管中，按步骤a的方法，测定该待测液的吸光度At，以及空白吸光度A0，然后计算出 Ln(A0/At)，将该Ln(A0/At)值代入上述的曲线方程，即可求出对应的碘离子的浓度，根据溶液中碘离子的浓度，计算饲料中碘化酪蛋白的量。

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