瘤胃液或青贮饲料发酵液中L-和D-型乳酸定量分析方法

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发明 (设计)人：常影;邱静;孟庆翔;周志强国际申请：
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专利代理机构：   北京众合诚成知识产权代理有限公司代   理   人：李光松

摘要　
本发明公开了属于乳酸分析技术范围的一种瘤胃液或青贮饲料发酵液中L-和D-型乳酸定量分析方法。该方法利用手性试剂L-薄荷醇作为衍生化试剂与乳酸对应异构体进行酯化反应，得乳酸薄荷醇酯，然后在气相色谱仪上进行分析，显示对应乳酸对应异构体L-和D-型乳酸的不同谱图，根据此谱图拆分和定量分析出瘤胃液或青贮饲料发酵液中L-和D-型乳酸和计算出L-乳酸和D-乳酸含量。解决了现有技术方案中L-和D-乳酸拆分操作复杂、成本高、灵敏度低和拆分不完全等问题。该方法具有成本低、拆分完全、灵敏度高以及可以同时测定乳酸对应异构体和其它短链脂肪酸的优点。该技术方案主要用于牛羊等反刍动物瘤胃发酵参数测定以及青贮饲料品质评定。
主权项　
1.一种瘤胃液或青贮饲料发酵液中L-和D-型乳酸定量分析方法，其特征在于：在从瘤胃液或青贮饲料发酵液中萃取的乳酸中，加入手性试剂L-薄荷醇作为衍生化试剂，并与乳酸对应异构体进行酯化反应得乳酸薄荷醇酯，然后在气相色谱仪上进行分析，显示对应乳酸对应异构体L-和D-型乳酸的不同谱图，根据此谱图拆分和定量分析出瘤胃液或青贮饲料发酵液中L-和D-型乳酸，分析过程如下： 1).萃取瘤胃液或青贮饲料发酵液中的乳酸：将牛羊瘤胃液或青贮饲料发酵液，先离心沉淀，取上清液与去蛋白溶液均匀混合，然后冷冻使其中蛋白质凝固，待上清液解冻后再以离心方式去蛋白，将上清液置于玻璃分液漏斗中，再用常规方法萃取后，将萃取液用旋转蒸发仪减压浓缩，得含有萃取液的乳酸液； 2).酯化反应：在含有萃取液的乳酸液中按(w/w)比例加入衍生化试剂L -薄荷醇、滴入硫酸催化剂和苯，回流酯化反应后，得乳酸的薄荷醇衍生化产物乳酸薄荷醇酯； 3).气相色谱分析：当乳酸薄荷醇酯冷却后，加入蒸馏水，混和均匀，以离心沉淀，取含乳酸薄荷醇酯上清液1μl，在配有氢火焰离子检测器的气相色谱仪上进行分析，得对应异构体的L-和D-型乳酸的不同谱图，根据此谱图可拆分出瘤胃液或青贮饲料发酵液中L-和D-型乳酸； 4).定量分析：对照质谱仪进行的L-和D-乳酸分析结果，确定L-乳酸和D- 乳酸的保留时间分别为5.625min和5.722min，根据样本测定与标准液中L-乳酸和D-乳酸的峰面积值，计算出样本中L-乳酸和D-乳酸含量。

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