细胞数目技术测定<%=id%>

操作步骤

１．样品取悬浮细胞小孢子或原生质体悬液，稀释到一定比例。

２．检查记数板在正式计数前，先用显微镜检查记数板的计数室，看其是否沾有杂质或干枯的菌体。若有污物，则需作以下几步清洗：

（1）擦洗。用药棉蘸取95%酒精，轻轻擦洗计数板的计数室。

（2）冲洗。用蒸馏水冲洗计数板，并用毛边纸吸干其上的水分（注意：勿哟内火焰来烤干）最后用擦镜纸揩干净。

（3）镜检。镜检清洗后的计数板，直至计数室无污物时，才可用于细胞的计数。

３．加样先将盖波片安方在计数室上面，然后摇匀样品取悬液，使它沿着盖波片和计数板间的缝隙渗入计数室，连续2~3次，直至充满计数室平台为止。

４．计数将加好样品的记数板置于显微镜载物台的中央，然后按下列步骤操作：

（1）找计数室。先在低倍显微镜下寻找计数板上的大方格网位置。寻找时显微镜的光圈要适当缩小，使视野偏暗。然后顺着大方格线，移动计数板，使计数室位于视野中间。

（2）转高倍镜。转至高倍镜后，适当调节光度，使细胞和计数室线条均清晰为止。然后将计数室一角的中格移至视野中。

（3）计数。通常以计5个中格的细胞值来代表计数室中的细胞量。将凡要计数的中格中的细胞逐一计数。计数时为了避免重复或遗漏，常将分布在格线上的菌体，一律以接触方格底线和有侧线上的菌作为计入本格内的菌数。以减少人为计数误差。将计的细胞数填入表格中。

（4）清洗计数完毕后，记数板先用95%酒精轻轻擦洗，再用蒸馏水淋洗，然后吸干，最后用擦镜纸揩干净。

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