建立PCR产物的新检测体系

　　PCR技术，在遗传病的异常基因分析、肿瘤分子标志物的判定以及疾病病原体的检测上已广泛应用。在实践中我们发现有三个问题急待解决：(1)PCR产物的污染；(2)PCR产物自动化的检测手段；(3)PCR模板的定量。我们吸取国内外经验，研究和建立了一种新的PCR检测体系，使之能基本解决上述问题。　　一、新检测体系的主要组成　　1.在PCR反应体系上：(1)以dUTP代替普通PCR中的dTTP，(2)加入专门识别、切断双链上的dUTP的尿嘧啶N-糖基化酶(Uracil N-Glycosylase)；(3)所应用的特异引物是由生物素(biotin)标记的。　　2.杂交：PCR产物的杂交反应，在已包被特异探针的酶标盘上进行。　　3.类似Elisa方法的检测系统：洗去杂交后酶标盘上的游离物质后，将卵白素(avidin)与辣根过氧化物酶的偶联液加入酶标盘，与因杂交而被固定在酶标盘底的biotin相结合，并与过氧化物和麝香草酚蓝(TMB)形成颜色复合物，经酶标仪测吸光度(A，曾称光密度)值定量。　　二、操作的具体步骤　　1.DNA模板制备：50 μl待检标本与200 μl提取液混匀，60℃ 30分钟，100℃ 30分钟(不能用水浴方式)。　　2.PCR扩增：50 μl PCR液(尿嘧啶N-糖基化酶，Bio-引物，AUGC四种碱基，Taq酶，缓冲液)，加入50 μl模
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