肝细胞生长因子拮抗剂活性研究 |
|
|
| 来源：《中国生物工程杂志》 更新时间：2009-12-15 10:57:21 |
|
|
|
|
NK4蛋白是近年来发现的肝细胞生长因子的最佳拮抗剂，在一篇文章中，研究人员将NK4基因插入载体pET-26b(+)，构建重组原核表达载体，转化大肠杆菌，进行了这种分子的活性研究。
NK4是肝细胞生长因子（hepatocytegrowthfactor，HGF）α链的含 447个氨基酸的片段，包括N末端的发夹结构和4个Kringle结构，编码序列长度1434bp，相对分子量50kDa。NK4保留了与受体cMet结合的结构域，可与HGF竞争结合cMet受体，但不能诱导cMet的酪氨酸磷酸化，从而阻断 HGF／Met系统的信号转导，抑制HGF的生物学效应，是目前已知的 HGF的最佳拮抗剂。体外实验证实NK4可抑制HGF诱导的肿瘤细胞的增殖、迁徙和侵袭。此外，NK4还能抑制血管新生。因此NK4在肿瘤治疗方面前景广阔。
研究人员为规模化生产NK4蛋白，将NK4基因插入载体pET-26b(+)，构建重组原核表达载体pET-26b(+)-NK4，并转化大肠杆菌Rosseta（DE3）。转化菌经IPTG诱导后以包涵体形式大量表达重组蛋白，占菌体总蛋白的42%。包涵体用盐酸胍溶解后经NiNTA树脂亲和层析纯化，蛋白纯度约为95%，经Western blot证实为NK4蛋白。纯化的重组蛋白行稀释复性后可抑制Hela细胞的贴壁、迁徙，并诱导其凋亡，证实制备的NK4蛋白具有生物活性。
外源性蛋白表达通常采用真核表达和原核表达两种方式，前者获得的蛋白活性较高，但效率低，不便于规模化生产；后者成本低且可大量表达，虽存在蛋白易发生折叠错误形成无活性的包涵体等问题，但可通过复性使目的蛋白恢复生物学功能。这项研究在现工作基础上构建NK4重组原核表达载体，并进行了相关条件的摸索，为后续NK4的深入研究提供了依据。
参与这项研究的包括温州医学院，重庆医科大学的裴仁治教授，涂植光教授，岑东博士等，文章发表在《中国生物工程杂志》上。（来源：生物通）
|
上一篇科学技术： 宫颈癌风险HPV DNA检测优于细胞学检测
下一篇科学技术： 研究称使用手机与患脑瘤无关 |
|
|
|
|
